Набор специфических компонентов для диагностики болезни овец brucella ovis

ОКСТУ 9382

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ:

К.В.Шумилов, канд. вет. наук (руководитель темы); У.Э.Ниязов, канд. вет. наук; Т.И.Малахова, канд. вет. наук

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 декабря* N 3761
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. — Примечание изготовителя базы данных.

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 3164-78. — Примечание изготовителя базы данных.

Настоящий стандарт распространяется на антиген, предназначенный для диагностики инфекционного заболевания овец, вызываемого Бруцеллой овис, методом реакции длительного связывания комплемента (РДСК).

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 5157-85.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Антиген по своим физическим и биологическим свойствам должен соответствовать характеристикам и нормам, указанным в табл.1.

Таблица 1

2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

2.1. Отбор проб

2.1.1. Для проведения испытания от каждой серии отбирают десять флаконов. Пять флаконов используют для анализа, а пять — хранят в архиве государственного контролера в течение 18 мес.

2.1.2. Флаконы, предназначенные для хранения, сопровождают документом с указанием:

наименования препарата;

даты изготовления;

номера серии;

номера контроля;

даты отбора пробы;

общего количества упаковочных единиц и объема серии;

должности и подписи лица, отобравшего пробу;

обозначения настоящего стандарта.

2.2. Определение внешнего вида, цвета и наличия посторонней примеси

Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, хлопьев, осадка каждый флакон с препаратом встряхивают и просматривают в проходящем свете.

2.3. Определение стерильности

Сущность метода заключается в определении роста бактериальной и грибковой микрофлоры в посевах из проб антигена на питательных средах.

2.3.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

термостаты с температурой нагрева (22±2) °С и (37±0,5) °С;

пипетки мерные вместимостью 1 и 2 см по ГОСТ 20292-74;

пробирки по ГОСТ 25336-82;

флаконы стеклянные вместимостью 100 см;

бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 20730-75;

бульон мясо-пептонный печеночный (МППБ) под вазелиновым маслом;

агар мясо-пептонный (МПА);

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76;

агар микробиологический по ГОСТ 17206-84* или агар пищевой по ГОСТ 16280-70**;
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 17206-96;
** На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 16280-2002. — Примечания изготовителя базы данных.

масло вазелиновое по ГОСТ 3164-78;

раствор физиологический, pH 7,0-7,2;

агар Сабуро;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77.

2.3.2. Проведение испытания

Посев проводят из каждого отобранного для испытания флакона в объеме 0,2-0,3 см в пробирки с МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, агаром Сабуро и по 0,5-1 см во флаконы с МПА и МППБ под вазелиновым маслом. Посевы проводят в две пробирки и два флакона с каждой средой. Питательные среды с посевами выдерживают при температуре (37±0,5) °С, а на агаре Сабуро при температуре (22±2) °С в течение 10 дней. В посевах на питательных средах не должно быть роста бактериальной микрофлоры и грибов.

2.4. Определение активности, специфичности, гемотоксичности и антикомплементаpных свойств

Сущность метода заключается в способности антигена образовывать комплекс со специфическими антителами, выявляемый в РДСК.

2.4.1. Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

баню водяную с температурой 38 °С и 62-64 °С;

холодильник, поддерживающий температуру 2-4 °С;

пробирки по ГОСТ 25336-82;

штативы;

пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см по ГОСТ 20292-74;

колбы мерные вместимостью 100, 200 и 1000 см по ГОСТ 20292-74;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

полиглобулин для стандартизации овисных антигенов или референтную овисную сыворотку с титром в РДСК 1:20 четыре креста (+ + + + );

две нормальные сыворотки крови баранов разных серий;

S-бруцеллезную сыворотку с титром в РДСК 1:40 четыре креста ( + + + +);

Таблица 2

Титрация овисного антигена

Таблица 3

Титрация овисного антигена и примерный результат

Таблица 4

Титрация гемолитической системы для реакции длительного связывания комплемента

Общий титр гемолитической системы — 1,2 см
Рабочий титр — 1,0 см

Примечание. ПГ — полный гемолиз, ЧГ — частичный гемолиз, 3Г — задержка гемолиза. Опыт проводится параллельно с двумя негативными сыворотками.

антиген бруцеллезный для РА, РСК (РДСК);

комплемент для РСК;

сыворотку гемолитическую для РСК;

эритроциты барана, 3-4%-ную взвесь в физиологическом растворе;

физиологический раствор, pH 7,0-7,2.

2.4.2. Проведение испытания

Определение активности, специфичности, гемотоксичности и антикомплементарных свойств антигена проводят в РДСК по табл.2 и 3.

Для испытания в РДСК испытуемый антиген разводят физиологическим раствором в соотношении 1:50, 1:100, 1:150, 1:200, 1:250, 1:300, 1:350, 1:400; полиглобулин или референтную овисную сыворотку — в разведении 1:10; S — бруцеллезную сыворотку — в разведении 1:5 и 1:10; две нормальные сыворотки крови баранов разных серий — в разведении 1:5.

Контрольный овисный и бруцеллезный антигены используют в рабочих титрах.

Комплемент разводят физиологическим раствором 1:20 — :30 в зависимости от титра.

Гемолитическую систему готовят из равных объемов взвеси эритроцитов барана в физиологическом растворе (из осадка эритроцитов, отмытых 2-3 раза центрифугированием с частотой вращения 2500-3000 мин в течение 10-12 мин) и разведении гемолитической сыворотки в утроенном-учетверенном титре. Определение рабочего титра гемолитической системы для РДСК проводят по табл.4.

При испытании антигена на антикомплементарность вместо сывороток вносят равный объем антигена в том же разведении, а при испытании на гемотоксические свойства физиологическим раствором заменяют комплемент и сыворотку.

Реакцию оценивают по четырехбальной системе в крестах

четыре креста (++++) — гемолиз эритроцитов от 0 до 0%;

три креста (+++) — гемолиз эритроцитов св. 10 до 40%

два креста (++) — гемолиз эритроцитов св. 40 до 70%;

один крест (+) — гемолиз эритроцитов св. 70 до 90%;

отрицательная реакция (-) — гемолиз эритроцитов св. 90 до 100%.

Титром антигена считают наибольшее его разведение, вызывающее полную задержку гемолиза эритроцитов с полиглобулином или референтной овисной сывороткой в разведении 1:10

3. ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЯ