Зуев прионные болезни человека и животных
Если конформационные изменения белков млекопитающих определяют диапазон их действия от жизненно необходимых до смертельно опасных, то мы вправе полагать, что именно конформационные белки могут выполнять роль главных регуляторов в организме, в том числе, по-видимому, и такого процесса, как и ограничение и самой жизни.
Четыре главных признака, отличающие медленные инфекции:
необычно продолжительный (месяцы, годы) инкубационный период;
медленно прогрессирующий характер течения;
необычность поражения органов и тканей;
неизбежность смертельного исхода.
Спустя несколько лет [после 1960 г.] утверждению вирусной природы всех без исключения [еще не открыты прионы] медленных инфекций способствовало и открытие вирусной этиологии типичной медленной инфекции детей и подростков – подострого склерозирующего панэнцефалита, известного еще с 1933 г. Оказалось, что это смертельное заболевание вызывает вирус кори, который уже много лет считался возбудителем давно и хорошо известной детской заразной болезни.
За короткое время был накоплен большой и весьма неожиданный фактический материал: оказалось, что очень многие вирусы, давно и хорошо известные как возбудители острых заболеваний, способны при определенных условиях вызывать и организме медленный инфекционный процесс, полностью отвечающий всем 4 признакам медленных инфекций. В числе таких вирусов оказались вирусы кори, краснухи, герпеса, клещевого энцефалита, лимфоцитарного хориоменингита, африканской лихорадки свиней, инфекционной анемии лошадей, бешенства, вирусы семейства папова, гриппа, иммунодефицита человека и др.
В литературе постепенно накапливались данные об особой группе медленных инфекций человека и животных, патоморфологические признаки которых весьма существенно отличались выраженным своеобразием, проявляющимся только в поражении ЦНС, в которой на основе первично-дегенеративных процессов (без признаков воспаления) развивается характерная картина формирования, так называемого, губкообразного состояния серого и/или белого вещества головного, а иногда и спинного мозга, что может сопровождаться образованием амилоидных бляшек и выраженным глиозом.
Подобное своеобразие патоморфологической картины определило и первичное (и до сих пор используемое) название всей группы этих болезней – «трансмиссивные губкообразные энцефалопатии» (ТГЭ). Именно трансмиссивность губкообразных изменений только в ЦНС и является их патогномоничным признаком.
В начале 80-х годов американский биохимик Стэнли Прузинер показал, что возбудителем наиболее распространенной в природе ТГЭ – скрепи (козы, овцы) – является безнуклеиновый низкомолекулярный (27-30 кДа) белок, который он назвал «инфекционный прионный белок». В качестве инфекционной единицы Прузинер предложил наименование «прион» (термин образован как анаграмма английских слов «белковая инфекционная (частица)». Прион как инфекционная единица состоит из молекул инфекционного прионного белка.
Общая классификация прионных болезней включала 4 болезни человека и 6 болезней животных. В последние годы список заметно пополнился, и если в числе прионных болезней прибавилась лишь одна нозологическая форма, то число прионных болезней животных, по меньшей мере, удвоилось.
Установлено, что в отличие от всех известных инфекционных болезней прионные болезни человека могут возникать как:
инфекционные
спорадические
наследственные.
Собственно механизм накопления инфекционного белка в зараженном организме сегодня точно неизвестен. Вместе с тем, исходя из определения, что это посттрансляционный процесс, очевидно, что инфекционный прионный белок вызывает в здоровом организме трансформацию нормального прионного белка в инфекционную форму за счет его (нормального белка) конформационных (т.е. пространственных) изменений. В этом случае речь идет об изменении третичной или даже четвертичной структуры исходного белка PrPC.
Таким образом, процесс накопления инфекционного прионного белка происходит не в результате синтеза в зараженном организме молекул PrPScde novo, а вследствие конформационных изменений уже синтезированных перед этим нормальных молекул PrPC под влиянием инфекционного прионного белка PrPSc. Процесс накопления инфекционного прионного белка носит лавинообразный характер.
Заболевания, вызванные прионами, характеризуются рядом признаков, сочетание которых определяется биологическими особенностями их возбудителей:
длительный инкубационный период (от месяцев до десятков лет);
отсутствие воспалительных изменений;
хронически прогрессирующая патология
отсутствие ремиссий и выздоровления
Для прионных болезней характерен ряд отрицательных признаков, которые не наблюдаются при заболеваниях, вызываемых вирусами:
отсутствие продукции ИФН и нечувствительность к ИФН;
отсутствие в составе возбудителя инфекционных НК;
неспособность прионов интерферировать с вирусами;
нечувствительность к иммуносупрессирующему действию АКТГ, кортизона, циклофосфамида, γ-лучей, антилимфоцитарной сыворотки, тимэктомии и спленэктомии, отсутствие влияния адъювантов;
интактность В- и Т-клеток.
Комбинация всех перечисленных признаков, каждых из которых не является чем-то уникальным, и определяет своеобразие прионных болезней.
Прионные болезни являются нейродегенеративными заболеваниями, в возникновении которых фундаментальную роль играют конформационные изменения белков, а сам механизм развития болезни является беспрецедентным (Harrison, 1997).
Источник
© Â.Ì.Ðîéõåëü
Ìåäëåííûå áîëåçíè
÷åëîâåêà è æèâîòíûõ,
âûçâàííûå ïðèîíàìè
Â.Ì.Ðîéõåëü
Âèêòîð Ìîèñååâè÷ Ðîéõåëü, ä. ì. í., âåäóùèé íàó÷íûé ñîòðóäíèê
Èíñòèòóòà ïîëèîìèåëèòà è âèðóñíûõ ýíöåôàëèòîâ èì.Ì.Ï.×óìàêîâà ÐÀÌÍ.
Ýòà ãðóïïà çàáîëåâàíèé ïðîñëàâèëàñü ïîñëå ðàçðàçèâøåéñÿ â Âåëèêîáðèòàíèè
ýïèçîîòèè ãóáêîîáðàçíîé ýíöåôàëîïàòèè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà, áîëüøå èçâåñòíîé
ïîä íàçâàíèåì «êîðîâüå áåøåíñòâî». Ê 1997 ã. áûëî èíôèöèðîâàíî îêîëî 1
ìëí ãîëîâ êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà, ïðèìåðíî 54 òûñ. èíôèöèðîâàííûõ æèâîòíûõ
ïîïàëè â ïèùåâóþ öåïü ëþäåé [1]. Îñîáåííî áûë íàïóãàí
ìèð, êîãäà ïîÿâèëèñü ñâåäåíèÿ î âîçìîæíîé ñâÿçè ìåæäó ýòèì çàáîëåâàíèåì
è âîçíèêíîâåíèåì íîâîãî âàðèàíòà áîëåçíè Êðåéòöôåëüäòà-ßêîáà — ñìåðòåëüíîé
èíôåêöèè ÷åëîâåêà, êîòîðàÿ, â îòëè÷èå îò åå êëàññè÷åñêîãî âàðèàíòà, ïîðàæàåò
ìîëîäûõ ëþäåé, êàê ïðàâèëî, â âîçðàñòå 27 ëåò [2, 3].
Ñëó÷àè (óêàçàíû ÷èñëàìè) «êîðîâüåãî áåøåíñòâà»
ñðåäè ñåëüñêîõîçÿéñòâåííûõ æèâîòíûõ è ðèñê çàðàæåíèÿ ÷åëîâåêà áîëåçíüþ
Êðåéòöôåëüäòà-ßêîáà â íåêîòîðûõ åâðîïåéñêèõ ñòðàíàõ. Ðèñê ïîÿâëåíèÿ ýòîãî
çàáîëåâàíèÿ â ÑØÀ è Êàíàäå ìàëîâåðîÿòåí, íî íå èñêëþ÷åí.  îñòàëüíûõ ñòðàíàõ
îïàñíîñòü èíôåêöèè êðàéíå ìàëà.
Íåò íè÷åãî óäèâèòåëüíîãî, ÷òî ýòè ñîáûòèÿ âûçâàëè ïîâûøåííûé èíòåðåñ ñïåöèàëèñòîâ
ê íîâîìó òèïó èíôåêöèè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ. Àêòèâèçèðîâàëèñü ïîèñêè, à
çàòåì èçó÷åíèå âåñüìà ñâîåîáðàçíîãî âîçáóäèòåëÿ, ïðèíöèïèàëüíî îòëè÷àþùåãîñÿ
îò âñåõ èçâåñòíûõ èíôåêöèîííûõ àãåíòîâ — âèðîèäîâ, âèðóñîâ, áàêòåðèé è
ïðîñòåéøèõ. Õîòÿ â Ðîññèè íåò ðåàëüíîé óãðîçû ìàññîâîãî çàðàæåíèÿ âîçáóäèòåëåì
ýòîãî ýêçîòè÷åñêîãî çàáîëåâàíèÿ, òåì íå ìåíåå áèîìåäèöèíñêèå èññëåäîâàíèÿ
âåäóòñÿ è ó íàñ.
«Èñòîðèÿ áîëåçíè»
Ïîíÿòèå «ìåäëåííûå áîëåçíè» âïåðâûå ââåë èñëàíäñêèé èññëåäîâàòåëü Á.Ñèãóðäññîí
åùå â 1954 ã., êîòîðûé è ñôîðìóëèðîâàë îñíîâíûå õàðàêòåðíûå ÷åðòû ýòîé
îñîáîé ôîðìû èíôåêöèè: ïîðàæåíèå îäíîãî îðãàíà èëè îäíîé ñèñòåìû è íàëè÷èå
îäíîãî õîçÿèíà, ïðîäîëæèòåëüíûé èíêóáàöèîííûé ïåðèîä (îò íåñêîëüêèõ ìåñÿöåâ
äî íåñêîëüêèõ ëåò), íåóêëîííîå íàðàñòàíèå êëèíè÷åñêîé ñèìïòîìàòèêè, íåèçáåæíî
ïðèâîäÿùåå ê ñìåðòè [4]. Ñèãóðäññîí èçó÷àë ìåäëåííûå áîëåçíè
òîëüêî æèâîòíûõ (â ÷àñòíîñòè, ïîäðîáíî èññëåäîâàë ðàñïðîñòðàíåííîå âî âñåì
ìèðå çàáîëåâàíèå îâåö — ñêðåïè), îäíàêî âñêîðå âûÿñíèëîñü, ÷òî îíè ìîãóò
ïîðàæàòü è ÷åëîâåêà.  1957 ã. àìåðèêàíñêèé ó÷åíûé Ê.Ãàéäóøåê îïèñàë íîâîå
çàáîëåâàíèå — êóðó, âûÿâëåííîå ó ïàïóàñîâ-êàííèáàëîâ, æèòåëåé Íîâîé Ãâèíåè.
Áîëåçíü íîñèëà ìàññîâûé õàðàêòåð, è âñêîðå áûëà äîêàçàíà åå èíôåêöèîííàÿ
ïðèðîäà. Çà ýòè èññëåäîâàíèÿ Ãàéäóøåê áûë óäîñòîåí â 1976 ã. Íîáåëåâñêîé
ïðåìèè.
Âîçáóäèòåëÿìè ìåäëåííûõ áîëåçíåé, êàê âïîñëåäñòâèè âûÿñíèëîñü, ìîãóò
ñòàòü õîðîøî èçâåñòíûå «âèíîâíèêè» îñòðûõ èíôåêöèé: íàïðèìåð, âèðóñû êîðè,
êðàñíóõè, ãåðïåñà, ãðèïïà, êëåùåâîãî ýíöåôàëèòà è äð. (âñåãî îêîëî 40 áîëåçíåé).
×òî ïðîèçîéäåò â îðãàíèçìå — ìåäëåííîå è ôàòàëüíîå òå÷åíèå èíôåêöèîííîãî
ïðîöåññà èëè îñòðîå — çàâèñèò îò óñëîâèé, â êîòîðûõ îêàçàëñÿ âîçáóäèòåëü
[5].
 Ãîëîâíîé ìîçã ÷åëîâåêà, ïîãèáøåãî îò áîëåçíè Êðåéòöôåëüäòà-ßêîáà. | Ãîðèçîíòàëüíûé ñðåç ãîëîâíîãî ìîçãà ÷åëîâåêà, óìåðøåãî |
Ìèêðîôîòîãðàôèÿ ãóáêîîáðàçíûõ èçìåíåíèé â
êîðå áîëüøîãî ìîçãà, âûçâàííûõ ïðèîíàìè (áîëåçíü Êðåéòöôåëüäòà-ßêîáà).1- ìèêðîâàêóîëè, 2 — ïîãèáàþùèå íåéðîíû ñ ãëèàëüíûìè
óçåëêàìè, 3 — ãèïåðòðîôèÿ àñòðîöèòîâ, 4 — ñìîðùåííûé íåéðîí, â êîòîðîì
óìåíüøèëèñü ïî îáúåìó öèòîïëàçìà è ÿäðî, 5 — íåéðîí, â êîòîðîì ñêîïèëîñü
ìíîãî ëèïîôóñöèíà è ïðîèçîøëî ñìåùåíèå ÿäðà. Óâåë. ´
400. (Â.À.Çóåâ, È.À.Çàâàëèøèí, Â.Ì.Ðîéõåëü, 1999.)
Ìèêðîôîòîãðàôèÿ êîíå÷íîé ôàçû ãóáêîîáðàçíûõ
èçìåíåíèé â êîðå áîëüøîãî ìîçãà: íåêîòîðûå âàêóîëè ñëèëèñü è îáðàçîâàëè
áîëåå êðóïíûå ïîëîñòè, íåéðîíû óæå ïîãèáëè. Óâåë. ´
100.
Äîâîëüíî äîëãî ñ÷èòàëîñü, ÷òî âñå ìåäëåííûå áîëåçíè âûçûâàþòñÿ âèðóñàìè,
îäíàêî ïîñòåïåííî, ïî ìåðå íàêîïëåíèÿ ôàêòè÷åñêîãî ìàòåðèàëà, ñòàëà âûäåëÿòüñÿ
îñîáàÿ ãðóïïà çàáîëåâàíèé ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ, âîçáóäèòåëåé êîòîðûõ ñòàëè
íàçûâàòü «íåîáû÷íûìè âèðóñàìè». Ñâîåîáðàçèå ýòèõ áîëåçíåé ïðîÿâëÿåòñÿ â
èçáèðàòåëüíîì ïîðàæåíèè öåíòðàëüíîé íåðâíîé ñèñòåìû, ÷òî íåóêëîííî ïðèâîäèò
ê ãóáêîîáðàçíîìó ñîñòîÿíèþ ñåðîãî è/èëè áåëîãî âåùåñòâà ãîëîâíîãî è ñïèííîãî
ìîçãà ïðè îòñóòñòâèè âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè. Âûÿñíåíèå ïàòîìîðôîëîãè÷åñêèõ
è êëèíè÷åñêèõ îñîáåííîñòåé ýòèõ íåîáû÷íûõ çàáîëåâàíèé ïîçâîëèëî âûäåëèòü
èõ â îòäåëüíóþ ãðóïïó ìåäëåííûõ áîëåçíåé ïîä îáùèì íàçâàíèåì «òðàíñìèññèâíûå
ãóáêîîáðàçíûå ýíöåôàëîïàòèè» (ÒÃÝ). Ïî ñîâðåìåííîé êëàññèôèêàöèè, ê íèì
îòíîñÿòñÿ ÷åòûðå áîëåçíè ÷åëîâåêà è øåñòü — æèâîòíûõ (òàáë.1).
Âñå ýòè çàáîëåâàíèÿ îáúåäèíÿåò íàëè÷èå åäèíîãî (èëè áëèçêîãî ïî ñâîéñòâàì)
âîçáóäèòåëÿ, îáùíîñòü ïàòîãåíåçà, ýêñïåðèìåíòàëüíî ïîêàçàííàÿ âîçìîæíîñòü
ïåðåíîñà èíôåêöèè è âîñïðîèçâåäåíèÿ êëèíè÷åñêîé è ïàòîãèñòîëîãè÷åñêîé êàðòèíû
çàáîëåâàíèÿ [6]. Ýòè âûâîäû — èòîã ìíîãîëåòíèõ èññëåäîâàíèé
ðàçíûõ ó÷åíûõ — ñôîðìóëèðîâàë àìåðèêàíñêèé áèîõèìèê Ñ.Ïðóçèíåð, ïîëó÷èâøèé
â 1997 ã. Íîáåëåâñêóþ ïðåìèþ «çà îòêðûòèå ïðèîíîâ — íîâîãî áèîëîãè÷åñêîãî
ïðèíöèïà èíôåêöèé». Äî ýòîãî âñå ïîïûòêè îáíàðóæèòü âîçáóäèòåëåé ÒÃÝ
çàêàí÷èâàëèñü íåóäà÷åé, õîòÿ ìíîãîå îá èõ ñâîéñòâàõ áûëî èçâåñòíî. Ïðóçèíåð
íàçâàë èíôåêöèîííûé àãåíò ïðèîíîì (÷àñòè÷íàÿ àíàãðàììà îò àíãë. proteinaceous
infectious particles — áåëêîâîïîäîáíàÿ èíôåêöèîííàÿ ÷àñòèöà), à áåëîê —
ÐrP (îò àíãë. prion protein).
Ïðèîíû, äåéñòâèòåëüíî, íåîáû÷íûå ïàòîãåíû, îíè íå ñïîñîáíû âûçâàòü îñòðóþ
ôîðìó èíôåêöèè. Ñâÿçàíî ýòî, âèäèìî, ñ ìåäëåííûì ïðîöåññîì «ïåðåðîæäåíèÿ»
â çàðàæåííîì îðãàíèçìå íåèíôåêöèîííîãî êëåòî÷íîãî áåëêà ÐrÐÑ (Ñ îò àíãë.
cåll — êëåòêà) — íîðìàëüíîãî êîìïîíåíòà òêàíåé ìëåêîïèòàþùèõ, â òîì ÷èñëå
è ÷åëîâåêà, — â èíôåêöèîííûé ïðèîííûé áåëîê ÐrÐSc (Sc îò àíãë. scrapie
— íàçâàíèÿ íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííîé â ïðèðîäå ïðèîííîé èíôåêöèè îâåö è
êîç).
Ïîñêîëüêó óæå íè ó êîãî íå âûçûâàåò ñîìíåíèé, ÷òî âîçáóäèòåëÿìè ÒÃÝ
ìîãóò áûòü òîëüêî ïðèîíû, òàêèå çàáîëåâàíèÿ ïðèíÿòî íàçûâàòü ïðèîííûìè
[7]. Ïðàêòè÷åñêèé èíòåðåñ ê ýòèì ñìåðòåëüíî îïàñíûì èíôåêöèÿì
áåçóñëîâíî ñâÿçàí ñ ñîáûòèÿìè ïîñëåäíåãî âðåìåíè è óâåëè÷èâàþùåéñÿ âåðîÿòíîñòüþ
âñòðå÷è ñ ýòèìè áîëåçíÿìè. Òåîðåòè÷åñêèé æå èíòåðåñ ê ïðîáëåìå îáóñëîâëåí
ðåçóëüòàòàìè ìîëåêóëÿðíî-áèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé ïðèîíîâ — íîâûõ è íåîáû÷íûõ
âîçáóäèòåëåé òÿæåëûõ çàáîëåâàíèé ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ, êîòîðûå, êàê âûÿñíèëîñü,
ìîãóò âîçíèêàòü íå òîëüêî â ðåçóëüòàòå èíôåêöèè, íî è ñïîðàäè÷åñêè è äàæå
ïåðåäàâàòüñÿ ïî íàñëåäñòâó.
Ñòðóêòóðà ïðèîííûõ áåëêîâ
Íàä âûÿñíåíèåì ñòðóêòóðû è õèìè÷åñêîé ïðèðîäû âîçáóäèòåëåé ÒÃÝ òðóäèëîñü
íåìàëî ñïåöèàëèñòîâ â òå÷åíèå, ïî êðàéíåé ìåðå, ïîëóâåêà.  ðåçóëüòàòå
ïîÿâèëîñü áîëüøîå êîëè÷åñòâî ðàçíîîáðàçíûõ ãèïîòåç, ìíîãèå èç êîòîðûõ òåïåðü
èìåþò ëèøü èñòîðè÷åñêîå çíà÷åíèå. Óäà÷à óëûáíóëàñü ãðóïïå èññëåäîâàòåëåé
èç Êàëèôîðíèéñêîãî óíèâåðñèòåòà (ÑØÀ), ðàáîòàþùèõ ïîä ðóêîâîäñòâîì Ïðóçèíåðà.
Ãëàâíàÿ èõ çàñëóãà â òîì, ÷òî èì óäàëîñü âûÿñíèòü áåëêîâóþ ïðèðîäó ïðèîíîâ.
Ðàçðàáîòàííàÿ àìåðèêàíñêèìè ó÷åíûìè ìíîãîñòóïåí÷àòàÿ ñèñòåìà âûäåëåíèÿ
èñõîäíîãî èíôåêöèîííîãî ìàòåðèàëà ïîçâîëèëà ïîëó÷èòü ïðåïàðàòû, î÷èùåííûå
â 100-1000 ðàç. Àãåíò îñòàâàëñÿ óñòîé÷èâûì ê âîçäåéñòâèþ ðåàãåíòîâ, èíàêòèâèðóþùèõ
íóêëåèíîâûå êèñëîòû, ÷òî óêàçûâàëî íà èõ îòñóòñòâèå â åãî ñîñòàâå. Èçó÷åíèå
î÷èùåííîãî ïðåïàðàòà ïîêàçàëî, ÷òî îí îáëàäàåò ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé îêîëî
èëè ìåíüøå 50 êÄà.  ðåçóëüòàòå äàëüíåéøåé î÷èñòêè ïðèîíà âûÿñíèëîñü, ÷òî
åãî îñíîâíîé êîìïîíåíò — ìàæîðíûé áåëîê ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 27-30 êÄà,
îáîçíà÷àåìûé êàê ÐrÐ 27-30.
Ïî ôèçèêî-õèìè÷åñêîé õàðàêòåðèñòèêå ÐrÐ 27-30 — ñèàëîãëèêîïðîòåèí (îëèãîñàõàðèäñîäåðæàùèé
ìåìáðàííûé áåëîê ñ îñòàòêàìè ñèàëîâîé êèñëîòû, êîòîðûå ïðèäàþò ìîëåêóëå
îòðèöàòåëüíûé çàðÿä) è ïåðâûé èäåíòèôèöèðîâàííûé ñòðóêòóðíûé êîìïîíåíò
ïðèîíà. Îáíàðóæåíèå ÐrÐ 27-30 íà ýòàïå ðàçâèòèÿ èíôåêöèè, ò.å. äî ïîÿâëåíèÿ
ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â òêàíÿõ, — ñâèäåòåëüñòâî òîãî, ÷òî ýòîò áåëîê
íå ìîæåò áûòü âòîðè÷íûì ïðîäóêòîì ïàòîëîãè÷åñêîé ðåàêöèè. Òàê ñòàëî î÷åâèäíûì,
÷òî ÐrÐ 27-30 èãðàåò öåíòðàëüíóþ ðîëü â ïàòîãåíåçå çàáîëåâàíèÿ.
Ïðè äàëüíåéøåì èçó÷åíèè ïðèîíîâ, âûäåëåííûõ èç ãîëîâíîãî ìîçãà çàðàæåííûõ
ñêðåïè æèâîòíûõ, áûëè îáíàðóæåíû ÷àñòèöû â âèäå ñòåðæíåé äèàìåòðîì 10-20
íì è äëèíîé 100-200 íì. Ïî óëüòðàñòðóêòóðå îíè íàïîìèíàëè àìèëîèä (àíîìàëüíûé
áåëîê, êîòîðûé îáû÷íî îáðàçóåòñÿ ïðè õðîíè÷åñêèõ çàáîëåâàíèÿõ, íàïðèìåð
òóáåðêóëåçå ëåãêèõ, êîñòåé è ò.ä.) è, âèäèìî, ïðåäñòàâëÿëè ñîáîé ïîëèìåðíóþ
ôîðìó ïðèîíà: êàæäûé ñòåðæåíü ñîäåðæàë îêîëî òûñÿ÷è ìîëåêóë ïðèîíà.
Âàæíûì øàãîì, èìåþùèì êàê òåîðåòè÷åñêîå, òàê è ìåòîäè÷åñêîå çíà÷åíèå,
áûëî ïîëó÷åíèå àíòèòåë ïðè èñïîëüçîâàíèè â êà÷åñòâå àíòèãåíà âûñîêîî÷èùåííûõ
ïðèîíîâ ñêðåïè. Â ñûâîðîòêàõ êðîëèêîâ, êîòîðûì ââîäèëè ÐrÐ 27-30, îáíàðóæåíû
àíòèòåëà íå òîëüêî ê íåìó, íî è ê äðóãèì áåëêàì, îòëè÷àþùèìñÿ áîëåå íèçêîé
ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé. Î÷åâèäíî, ýòè áåëêè ëèáî îáëàäàþò îäèíàêîâîé àíòèãåííîé
äåòåðìèíàíòîé (îáëàñòüþ àíòèãåíà, êîìïëåìåíòàðíîé àíòèòåëó) ñ ÐrÐ 27-30,
ëèáî îíè — ïðîäóêò åãî ðàñùåïëåíèÿ. Ïðè ïîìîùè èçãîòîâëåííîé àíòèñûâîðîòêè
ñ ïåðîêñèäàçíîé ìåòêîé óäàëîñü âûÿâèòü ëîêàëèçàöèþ ïðèîíîâ â îïðåäåëåííûõ
îòäåëàõ ãîëîâíîãî ìîçãà çàðàæåííûõ æèâîòíûõ (òàáë.2). Ñîãëàñíî ðàíåå ïîëó÷åííûì
äàííûì, ñòðóêòóðû, ñâÿçàííûå ñ ìå÷åíîé àíòèñûâîðîòêîé, îáëàäàëè õàðàêòåðèñòèêîé
àìèëîèäíûõ áëÿøåê. Èñïîëüçîâàíèå àíòèñûâîðîòêè ê ñèíòåòè÷åñêîìó ïåïòèäó,
ñîîòâåòñòâóþùåìó N-êîíöåâîé ÷àñòè ïðèîíà, ïîçâîëèëî ïðîâåñòè èíäèêàöèþ
áåëêà ñêðåïè-àññîöèèðîâàííûõ ôèáðèëë â ãîëîâíîì ìîçãå, ñåëåçåíêå è ëèìôàòè÷åñêèõ
óçëàõ çàðàæåííûõ æèâîòíûõ. Ïðè ýòîì ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû áûëè ïîëó÷åíû
íà ðàííèõ ýòàïàõ èíêóáàöèîííîãî ïåðèîäà.
Îïðåäåëåíèå àìèíîêèñëîòíîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè ÐrÐ 27-30 ïîçâîëèëî â
1985 ã. èäåíòèôèöèðîâàòü êîäèðóþùèé åãî ãåí Prnp. Îêàçàëîñü, ÷òî ýòîò ãåí
ñîäåðæèòñÿ â ãåíîìàõ íå òîëüêî èíôèöèðîâàííûõ ñêðåïè æèâîòíûõ, íî è çäîðîâûõ.
Ñîîòâåòñòâåííî ìÐÍÊ äëÿ ÐrÐÑ áûëà âûÿâëåíà â ãîëîâíîì ìîçãå è â äðóãèõ
òêàíÿõ êàê èíôèöèðîâàííûõ, òàê è êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ. Èñïîëüçóÿ ñîîòâåòñòâóþùóþ
àíòèñûâîðîòêó, óäàëîñü ïîêàçàòü, ÷òî â òêàíÿõ íåçàðàæåííûõ æèâîòíûõ ñîäåðæèòñÿ
áåëîê, ðîäñòâåííûé ÐrÐ 27-30, íî îòëè÷àþùèéñÿ îò íåãî ÷óâñòâèòåëüíîñòüþ
ê îáðàáîòêå ïðîòåàçîé Ê.
Áûëè èçó÷åíû òàêæå íåêîòîðûå äðóãèå õàðàêòåðèñòèêè ïðèîíîâ ñêðåïè è
áîëåçíè Êðåéòöôåëüäòà-ßêîáà.  ÷àñòíîñòè, áûëî ïîäòâåðæäåíî ïðåäïîëîæåíèå
î òîì, ÷òî èíôåêöèîííàÿ ÷àñòèöà àãåíòà ñîäåðæèò äâå ìîëåêóëû ÐrÐ è ÷òî
òàê íàçûâàåìûå ñåìåéíûå ôîðìû (ò.å. ñ íàñëåäñòâåííîé ïðåäðàñïîëîæåííîñòüþ)
ïðèîííûõ çàáîëåâàíèé ñâÿçàíû ñ êîíêðåòíûìè ìóòàöèÿìè â ãåíå Prnp. Íàïðèìåð,
ìóòàöèÿ, âûçûâàþùàÿ çàìåíó ïðîëèíà íà ëåéöèí â 102-ì ïîëîæåíèè ÐrÐ, îêàçàëàñü
ñâÿçàíà ñ ðàçâèòèåì ñèíäðîìà Ãåðñòìàííà-Øòðåóññëåðà-Øåéíêåðà, à çàìåíà
àñïàðàãèíîâîé êèñëîòû íà àñïàðàãèí (ìóòàöèÿ â 178-ì êîäîíå) ìîæåò áûòü
ñâÿçàíà êàê ñ áîëåçíüþ Êðåéòöôåëüäòà-ßêîáà, òàê è ñî ñìåðòåëüíîé ñåìåéíîé
áåññîííèöåé. Ê ñåãîäíÿøíåìó äíþ èçâåñòíî óæå î 20 ìóòàöèÿõ â ãåíå Prnp
÷åëîâåêà, ñâÿçàííûõ ñ ñåìåéíûìè ôîðìàìè ïðèîííûõ çàáîëåâàíèé.
Ôèçèêî-õèìè÷åñêèå ñâîéñòâà
Âî âòîðîé ïîëîâèíå 90-õ ãîäîâ, êîãäà óæå áûëà îïðåäåëåíà àìèíîêèñëîòíàÿ
ïîñëåäîâàòåëüíîñòü ÐrÐ è âûÿâëåí ãåí Prnp, íà÷àëèñü èíòåíñèâíûå ïîèñêè
ïðè÷èí ïàòîãåííîñòè ïðèîíîâ. Ñ ïîìîùüþ ñîâðåìåííûõ ìåòîäîâ ìîëåêóëÿðíî-ãåíåòè÷åñêîãî
àíàëèçà áûëè ïîëó÷åíû íîâûå äàííûå î âîçìîæíûõ âàðèàíòàõ ñîñòàâà è êîíôîðìàöèè
(óêëàäêè) ïîëèïåïòèäíîé öåïè ÐrÐ.  ÷àñòíîñòè, áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî êîíâåðñèÿ
íîðìàëüíîãî ïðèîííîãî áåëêà â åãî èíôåêöèîííóþ èçîôîðìó — ïîñòòðàíñëÿöèîííûé
ïðîöåññ [8]. Àíàëèç âòîðè÷íîé ñòðóêòóðû ÐrÐSc ïîêàçàë,
÷òî ýòîò ïåðåõîä õàðàêòåðèçóåòñÿ áîëüøèìè ñòðóêòóðíûìè èçìåíåíèÿìè ñàìîãî
ïðèîíà. Êëåòî÷íûé áåëîê ñîäåðæèò 42% a-ñïèðàëåé
è ïî÷òè íå ñîäåðæèò b-òÿæåé
(âñåãî îêîëî 3%), â òî âðåìÿ êàê â åãî èíôåêöèîííîé ôîðìå âûÿâëÿåòñÿ 30%
a-ñïèðàëåé è 43% b-òÿæåé
[9]. Â ýêñïåðèìåíòàëüíûõ èññëåäîâàíèÿõ áûëî ïîäòâåðæäåíî,
÷òî îáðàáîòêà íåèíôåêöèîííîãî áåëêà ðåàãåíòàìè, ñíèæàþùèìè îáðàçîâàíèå
b-òÿæåé,
òàêæå ïðèâîäèëà ê óìåíüøåíèþ èíôåêöèîííîñòè ïåðåðîæäåííîãî ïðèîíà. Îäíîâðåìåííî
ñíèæàëàñü è óñòîé÷èâîñòü ÐrÐSc ê äåéñòâèþ ïðîòåàçû Ê, ÷óâñòâèòåëüíîñòü
ê êîòîðîé ñ÷èòàåòñÿ ìàðêåðîì, îòëè÷àþùèì ÐrÐC îò ÐrÐSc.
Ïðåâðàùåíèå íîðìàëüíîãî áåëêà â ïàòîãåííûé, ñóäÿ ïî âñåìó, ïðîèñõîäèò
ïóòåì áåëîê-áåëêîâûõ âçàèìîäåéñòâèé, ïðè ýòîì íå èìååò çíà÷åíèÿ, ïîïàäàåò
ÐrÐSñ â îðãàíèçì èçâíå èëè âîçíèêàåò â íåì ñïîíòàííî (â ñëó÷àå ñïîíòàííûõ
è íàñëåäñòâåííûõ ïðèîííûõ áîëåçíåé). Êàê ýòî ïðîèñõîäèò, óâåðåííî ñêàçàòü
ïîêà íåëüçÿ, îäíàêî â íàñòîÿùåå âðåìÿ ïðåäëàãàþòñÿ äâå ìîäåëè, îïèñûâàþùèå
ýòî ïðåâðàùåíèå: «ãåòåðîäèìåðíàÿ» è «ïîëèìåðèçàöèîííàÿ». Ñîãëàñíî ïåðâîé,
ïðèîííîå ñîñòîÿíèå ïðèñóùå ìîíîìåðó áåëêà ÐrÐ, êîòîðûé êàòàëèçèðóåò êîíôîðìàöèîííûé
ïåðåõîä ìîëåêóëû ÐrÐC â ôîðìó ÐrÐSñ [10]. Ïîñëå òîãî
êàê íîðìàëüíûé áåëîê ïðèîáðåòàåò ïðèîííûå ñâîéñòâà, äèìåð äèññîöèèðóåò,
è äâå îñâîáîäèâøèåñÿ ìîëåêóëû ÐrÐSñ ìîãóò âíîâü âçàèìîäåéñòâîâàòü ñ î÷åðåäíûìè
ìîëåêóëàìè ÐrÐC. Ïðîöåññ íàïîìèíàåò öåïíóþ ðåàêöèþ è ìîæåò ïðîòåêàòü äîâîëüíî
áûñòðî, îäíàêî îñòàåòñÿ íåîáúÿñíåííûì ìåõàíèçì îáðàçîâàíèÿ àìèëîèäíûõ áëÿøåê.
Âòîðàÿ ìîäåëü ñ ýòîé òî÷êè çðåíèÿ áîëåå ïåðñïåêòèâíà, ïîñêîëüêó ðàññìàòðèâàåò
ïðèîí êàê óïîðÿäî÷åííûé ïîëèìåð ÐrÐ. Ïðîöåññ æå åãî êîíôîðìàöèîíîé ïåðåñòðîéêè,
ñîãëàñíî ýòîé òåîðèè, íàïîìèíàåò êðèñòàëëèçàöèþ, êîòîðóþ çàïóñêàåò îëèãîìåð
ÐrÐSñ [11]. Îòëîæåíèÿ áåëêà ÐrÐSñ (áëÿøêè) â òêàíÿõ ìîçãà
çàáîëåâøèõ ëþäåé îáû÷íî ñîäåðæàò íèòåâèäíûå àãðåãàòû ýòîãî áåëêà, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò
îá óïîðÿäî÷åííîé åãî ïîëèìåðèçàöèè.
Òàêèì îáðàçîì, â ðåçóëüòàòå ðàçíîñòîðîííèõ èññëåäîâàíèé áûëè ïîëó÷åíû
è ñèñòåìàòèçèðîâàíû èìåþùèå ïðèíöèïèàëüíîå çíà÷åíèå äàííûå î ñòðóêòóðå
è ôèçèêî-õèìè÷åñêèõ ñâîéñòâàõ ïðèîííûõ áåëêîâ. Àíàëèç ýòèõ ñâåäåíèé ñîçäàë
íåîáõîäèìûå ïðåäïîñûëêè äëÿ äàëüíåéøåãî óãëóáëåííîãî èçó÷åíèÿ áèîëîãè÷åñêèõ
îñîáåííîñòåé ïðèîííûõ áåëêîâ è ìåõàíèçìà ðàçâèòèÿ âûçûâàåìûõ èìè çàáîëåâàíèé
ëþäåé è æèâîòíûõ.
Áèîëîãè÷åñêèå îñîáåííîñòè
Íåñìîòðÿ íà îáèëèå ðåçóëüòàòîâ â èçó÷åíèè ïðèîííûõ áåëêîâ, ðîëü PrPC
â æèâîì îðãàíèçìå äî êîíöà íå èçâåñòíà. ßñíî îäíî ýòîò áåëîê æèçíåííî
íåîáõîäèì è ýâîëþöèîííî êîíñåðâàòèâåí, ïîñêîëüêó îáíàðóæåí ó ìíîãèõ ìëåêîïèòàþùèõ,
ïòèö è äàæå ó íèçøèõ ýâêàðèîò. Òàê, ïðè àíàëèçå ïåðâè÷íîé ñòðóêòóðû ÐrÐÑ
áûëî âûÿâëåíî, ÷òî 80% ïîñëåäîâàòåëüíîñòåé ÐrÐÑ ó ðàçíûõ âèäîâ æèâîòíûõ
èäåíòè÷íû, èñêëþ÷åíèå ñîñòàâëÿë ëèøü êóðèíûé ÐrÐÑ, ãäå èäåíòè÷íîñòü ïîñëåäîâàòåëüíîñòåé
ïî îòíîøåíèþ ê äðóãèì âèäàì ñîñòàâëÿëà âñåãî 30%. Òåì íå ìåíåå 24 àìèíîêèñëîòíûå
ïîñëåäîâàòåëüíîñòè, ðàñïîëàãàþùèåñÿ ìåæäó 112-ì è 135-ì àìèíîêèñëîòíûìè
îñòàòêàìè, ñîäåðæàòñÿ â ãåíîìàõ âñåõ ìëåêîïèòàþùèõ, à òàêæå êóð.
 ýêñïåðèìåíòàõ íà òðàíñãåííûõ ìûøàõ, ãîìîçèãîòíûõ ïî ïîòåðå ãåíà Prnp,
áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ýòè æèâîòíûå ïîñëå ðîæäåíèÿ ðîñëè «íîðìàëüíûìè», íî
ñïóñòÿ 70 íåäåëü ó íèõ ðàçâèëèñü ïðîãðåññèðóþùèå ñèìïòîìû àòàêñèè, â ÷àñòíîñòè
íàðóøèëàñü ìîòîðíàÿ êîîðäèíàöèÿ âñëåäñòâèå ýêñòåíñèâíîé ïîòåðè êëåòîê Ïóðêèíüå
(êðóïíûõ íåéðîíîâ êîðû ìîçæå÷êà). Ïîìèìî ýòîãî, óñòàíîâëåíî, ÷òî PrPC èãðàåò
âàæíóþ ðîëü â ðåãóëÿöèè öèðêàäèàííûõ (ñóòî÷íûõ) ðèòìîâ, âîçìîæíî, ó÷àñòâóåò
â àêòèâàöèè ëèìôîöèòîâ, à òàêæå âûïîëíÿåò ôóíêöèè òðîôè÷åñêîãî ôàêòîðà
äëÿ íåêîòîðûõ ïîïóëÿöèé íåéðîíîâ. Ñîõðàííîñòü PrPC èìååò çíà÷åíèå äëÿ ðåàëèçàöèè
íîðìàëüíîé ôóíêöèè ñèíàïñîâ.
 ïîñëåäíèå ãîäû ïîÿâèëèñü äàííûå, ñâèäåòåëüñòâóþùèå î ðîëè êëåòî÷íîãî
áåëêà â ðåãóëÿöèè ñíà, è áîëåå òîãî — âîçíèêíîâåíèå ñìåðòåëüíîé ñåìåéíîé
áåññîííèöû ñâÿçûâàþò ñ íàðóøåíèåì íîðìàëüíîé ôóíêöèè ýòîãî áåëêà [12].
 èññëåäîâàíèÿõ in vitro áûëî ïîêàçàíî, ÷òî PrPC âîâëåêàåòñÿ â ïðîöåññû
ðåãóëÿöèè ñîäåðæàíèÿ âíóòðèêëåòî÷íîãî Ñà2+
â íåéðîíàõ [13]. Óæå äîêàçàííûì ìîæíî ñ÷èòàòü è çíà÷åíèå
íîðìàëüíîãî êëåòî÷íîãî ïðèîíà â ñîõðàíåíèè ðåçèñòåíòíîñòè íåéðîíîâ è àñòðîöèòîâ
ê îêèñëèòåëüíîìó ñòðåññó, è ó÷àñòèå ýòîãî áåëêà â ìåòàáîëèçìå ìåäè â ãîëîâíîì
ìîçãå [14]. À ñîâñåì íåäàâíî áûëè ïîëó÷åíû äàííûå îá
ó÷àñòèè PrPC â òðàíñäóêöèè ñèãíàëîâ â íåðâíîé òêàíè [15].
Ýòîò ñïèñîê ìîæíî áûëî áû ïðîäîëæèòü, íî è òàê ÿñíî, ÷òî ïðåäñòàâëåíèÿ
î áèîëîãè÷åñêîé çíà÷èìîñòè PrPC â ïîñëåäíèå ãîäû ñóùåñòâåííî ðàñøèðèëèñü.
Òåïåðü ñòàëî èçâåñòíî, ÷òî PrPC ñèíòåçèðóåòñÿ â ýíäîïëàçìàòè÷åñêîé ñåòè
è äîâîëüíî áûñòðî äåãðàäèðóåò (âñåãî çà 5-6 ÷àñîâ). Ñèíòåçèðîâàííûé PrPC,
ïðîõîäÿ ÷åðåç àïïàðàò Ãîëüäæè, òðàíñïîðòèðóåòñÿ íà ïîâåðõíîñòü êëåòêè,
ãäå îí ñâÿçûâàåòñÿ ñ ãëèêîôîñôàòèäèëèíîçèòîëîì è â äàëüíåéøåì ïåðåíîñèòñÿ
âäîëü àêñîíà ïðè ïîìîùè áûñòðîãî è àêòèâíîãî (àíòåðîãðàäíîãî) òðàíñïîðòà.
 îòëè÷èå îò PrPC èíôåêöèîííûé ïðèîííûé áåëîê ïåðâè÷íî àêêóìóëèðóåòñÿ â
êëåòêàõ, íàêàïëèâàÿñü â öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ âåçèêóëàõ. Äàëüíåéøåå åãî íàêîïëåíèå
â ñèíàïòè÷åñêèõ ñòðóêòóðàõ è ñâÿçàííàÿ ñ ýòèì äåçîðãàíèçàöèÿ ñèíàïñîâ,
î÷åâèäíî, ñòàíîâèòñÿ ïðè÷èíîé ãëóáîêèõ íåâðîëîãè÷åñêèõ äåôåêòîâ è äåìåíöèè.
 èçó÷åíèè ïàòîãåíåçà è ýïèäåìèîëîãèè ïðèîííûõ áîëåçíåé ñóùåñòâóåò ìíîãî
áåëûõ ïÿòåí. Ê íèì îòíîñÿòñÿ, â ÷àñòíîñòè, ïóòè ïåðåäà÷è çàáîëåâàíèÿ â
ïðèðîäå, âçàèìîñâÿçü áîëåçíåé ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ, îïðåäåëåíèå «âõîäíûõ
âîðîò» èíôåêöèè [16]. Ñóäÿ ïî âñåìó, íàèáîëåå âåðîÿòíûé
ïóòü ïåðåäà÷è çàáîëåâàíèÿ — àëèìåíòàðíûé. Ïðàâîìåðíîñòü ýòîãî âûâîäà áûëà
êîñâåííî ïîäòâåðæäåíà, êîãäà äëÿ èñêîðåíåíèÿ êóðó íà î.Íîâàÿ Ãâèíåÿ äîñòàòî÷íî
áûëî çàïðåòèòü îáû÷àé ðèòóàëüíîãî êàííèáàëèçìà. Äîêàçàíî ýòî áûëî è â ýêñïåðèìåíòàõ,
â êîòîðûõ æèâîòíûì (â òîì ÷èñëå è ïðèìàòàì) ñêàðìëèâàëè âûñîêî èíôèöèðîâàííûå
ñóáñòðàòû — òêàíè ãîëîâíîãî ìîçãà áîëüíûõ æèâîòíûõ.
Ïîëó÷åíèå íîâûõ äàííûõ ïîçâîëèëî çàêëþ÷èòü, ÷òî ïðèîííûå áîëåçíè — íåéðîäåãåíåðàòèâíûå,
â âîçíèêíîâåíèè êîòîðûõ ôóíäàìåíòàëüíóþ ðîëü èãðàþò êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ
ïðèîíîâ, à ñàì ìåõàíèçì ðàçâèòèÿ áîëåçíè áåñïðåöåäåíòåí.
* * *
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé, ïðîâåäåííûõ â ïîñëåäíèå 10-15 ëåò, ïîçâîëèëè
ñ íîâûõ ïîçèöèé ïîäîéòè ê âîïðîñó î ïðèðîäå àãåíòîâ ÒÃÝ, à ñóììà ïîëó÷åííûõ
íîâûõ çíàíèé î ïðèîíàõ ïîñëóæèëà îñíîâàíèåì äëÿ îïòèìèñòè÷åñêîãî âûñêàçûâàíèÿ
Ïðóçèíåðà: «Ýðà ÷åðíîãî ÿùèêà áèîëîãèè ñêðåïè è áîëåçíè Êðåéòöôåëüäòà-ßêîáà,
âîçìîæíî, ïîäõîäèò ê êîíöó». Õî÷åòñÿ íàäåÿòüñÿ, ÷òî ïðîáëåìà ìåäëåííûõ
ïðèîííûõ áîëåçíåé äåéñòâèòåëüíî áóäåò ðåøåíà â ñêîðîì áóäóùåì. Óñïåõè â
ýòîé îáëàñòè î÷åâèäíû, î ÷åì ñâèäåòåëüñòâóåò õîòÿ áû òî, ÷òî íà ïðîòÿæåíèè
20 ëåò Íîáåëåâñêèé êîìèòåò äâàæäû îòìå÷àë ó÷åíûõ çà äîñòèæåíèÿ â îäíîé
è òîé æå îáëàñòè ìåäèêî-áèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé.
Ëèòåðàòóðà
1. Êåìïáåëë Ï.Í. // Âîïð. áèîë., ìåä. è ôàðìàö.
õèìèè. 1998. ¹4. Ñ.34-40.
2. Hill A., Debruslais M., Joiner M. et al. //
Nature. 1997. V.389. P.448-450.
3. Calza L., Manfredi R., Chiodo F. // Recenti
Prog. Med. 2001. V.92. P.140-149.
4. Sigurdsson P. // British Veterinary J. 1954.
V.110. P.341-354.
5. Çóåâ Â.À. Ìåäëåííûå âèðóñíûå èíôåêöèè ÷åëîâåêà
è æèâîòíûõ. Ì., 1988.
6. Prion Biology and Diseases / Ed. S.B.Prusiner.
N.Y.,
1999.
7. Çóåâ Â.À., Çàâàëèøèí È.À., Ðîéõåëü Â.Ì. Ïðèîííûå
áîëåçíè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ. Ì., 1999.
8. Pan K., Baldwin M., Nguyen J. et al. // Proc.
Natl. Acad. Sci. 1993. V.90. P.10926-10966.
9. Smith C., Collinge J. // Essay Biochem. 1995.
V.29. P.157-174.
10. Cohen F.E., Pan K.M., Huang Z. et al. //
Science. 1994. V.264. P.530-531.
11. Jarrett J.T., Lansbury P.T. // Cell. 1993.
V.73. P.1055-1058.
12. Tobler I., Deboer Ò., Fisher M. // J. Neurosci.
1997. V.17. P.1869-1879.
13. Herms J., Tings Ò., Dunker S. et al. //
J. Neurobiol. Dis. 2001. V.8. P.324-330.
14. Brown D. // J. Brain Res. Bull. 2001. V.55.
P.165-173.
15. Martins V., Mercadante A., Cabral A. et al.
//
Braz. J. Med. Biol. Res. 2001. V.34. P.585-595.
16. Ðîéõåëü Â.Ì. Ïàòîãåíåç è äèàãíîñòèêà íåêîòîðûõ
ìåäëåííûõ ïðèîíîâûõ íåéðîèíôåêöèé: Àâòîðåôåðàò íà ñîèñêàíèå ó÷åíîé ñòåïåíè
äîêòîðà ìåäèöèíñêèõ íàóê. Ì., 1997.
17. Brown P. // J. Microsci Res. Tech. 2001.
V.54. P.71-80.
Источник